编者按：在第59届欧洲糖尿病协会年会（EASD 2023）上，浙江省人民医院内分泌科武晓泓教授团队有3项研究被选中交流。1项口头报告关于2型糖尿病（T2DM）患者10年动脉粥样硬化性心血管疾病（ASCVD）风险，2项简短口头报告关于糖尿病血管内皮细胞损伤机制。本刊特邀武教授介绍这3项研究结果并予以精彩点评。

正常体重内脏型肥胖的T2DM患者10年ASCVD风险显著增加[1]

第一作者：郑佳  浙江省人民医院

目的

研究表明，内脏型肥胖与T2DM患者的高心血管事件风险相关。体重正常[由体重指数（BMI）定义]的内脏型肥胖是否比超重或肥胖、伴或不伴内脏型肥胖的患者有更高的ASCVD风险尚不清楚。因此，本研究旨在探讨T2DM患者一般肥胖和内脏肥胖与10年ASCVD风险之间的关系。

方法

纳入2020~2022年来自浙江省11家国家代谢性疾病管理中心的6997名T2DM患者为研究对象。当BMI范围在18.5~24 kg/m²时，受试者被认为体重正常；BMI范围在24~28 kg/m²为超重；BMI≥28 kg/m²为肥胖。内脏型肥胖定义为内脏脂肪面积（VFA）≥100 cm²。根据BMI和VFA的不同组合将患者分为6组。采用逐步逻辑回归分析BMI和VFA不同组合的10年ASCVD高风险的OR值。构建诊断10年ASCVD高风险的受试者工作特征（ROC）曲线，并估计ROC曲线下面积。使用限制性立方样条分析探讨VFA水平与10年ASCVD高风险之间的潜在非线性关系。使用多元线性回归确定影响T2DM患者VFA变化的因素。

结果

在T2DM患者中，体重正常的内脏型肥胖患者10年ASCVD风险最高，其OR值比BMI超重或肥胖但没有内脏型肥胖的患者高2倍或3倍以上（均P<0.05）。VFA诊断10年ASCVD高风险的阈值为90 cm²。多元线性回归分析显示，年龄、高血压、饮酒、空腹胰岛素、空腹血糖、餐后2小时C肽、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平与T2DM患者VFA水平有关（均P<0.05）。

结论

T2DM合并正常体重内脏型肥胖的患者10年ASCVD风险高于T2DM合并BMI定义的超重或肥胖患者，无论是否伴有内脏型肥胖，对这类患者应启动ASCVD一级预防的标准化管理。

晚期糖基化终末产物（AGEs）诱导人主动脉内皮细胞铁死亡的机制及GLP-1的干预作用[2]

第一作者：胡珂昕  浙江省人民医院

目的

糖尿病血管疾病是糖尿病患者致死致残的主要原因。长期高血糖环境下产生的AGEs可导致内皮细胞（ECs）损伤，诱发血管病变。铁死亡是一种新的细胞死亡形式，伴有大量活性氧和脂质过氧化物的形成，已被证明在动脉粥样硬化病变组织中表达。铁死亡是否参与了AGEs诱导的ECs功能障碍尚未得到探讨。胰高血糖素样肽-1（GLP-1）具有显著的心血管保护作用。目前还不清楚它是否能保护ECs免受铁死亡的影响。因此，本研究以AGEs刺激的人主动脉内皮细胞（HAECs）为实验模型，观察HAECs的铁死亡和GLP-1干预下产生的保护作用，并探讨其分子机制。

方法

用AGEs培养HAECs，用CCK8试剂盒检测细胞活力，用电子显微镜观察线粒体形态变化，用试剂盒检测Fe2+和脂质过氧化产物（MDA）的含量。Fer-1（一种铁死亡抑制剂）作为阴性对照。RT-PCR检测PTGS2、ACSL4和GPX4基因的mRNA水平。采用Western印迹法检测上述分子和LKB1/AMPK通路的表达。用siRNA抑制AMPK的表达，用GLP-1 (7-37)、GLP-1 (9-36) 和GLP-1 (28-36)对细胞进行预处理，观察铁死亡的变化。

结果

与对照组相比，AGE组细胞活力显著下降（P<0.05），细胞线粒体形态异常，Fe2+和MDA含量显著增加（均P<0.05），铁死亡正向调控蛋白PTGS2和ACSL4的表达显著上调（均P<0.05），负向调控分子GPX4的表达显著下调（P<0.05）。上述现象在Fer-1干预后均得到缓解（均P<0.05）。AGEs组LKB1/AMPK通路的表达下调（P<0.01），siRNA抑制AMPK增加铁死亡，提示AGEs通过LKB1/AAMPK通路诱导HAECs铁死亡。与AGE组相比，GLP-1（7-37）、GLP-1（9-36）和GLP-1（28-36）预处理后，细胞活力显著增加（P<0.05），Fe2+和MDA含量降低（均P<0.05），GPX4表达上调（P<0.05）、PTGS2和ACSL4表达下调（均P<0.05），LKB1和AMPK磷酸化水平显著升高（均P<0.05）。

结论

AGEs可以通过抑制LKB1/AMPK通路诱导HAECs发生铁死亡，GLP-1及其小分子片段可以减轻AGEs诱导的HAECs铁死亡。

AGEs作用下人主动脉内皮细胞中m6A甲基化图谱的变化[3]

第一作者：唐珑佳  浙江省人民医院

目的

m6A修饰是否参与糖尿病诱导的动脉粥样硬化过程尚未见报道。为了探究其具体机制，我们以AGEs诱导的HAECs为模型，分析了m6A相关调节因子的表达水平和m6A甲基化图谱，以探讨糖尿病血管病变中m6A修饰的变化。

方法

将HAECs在200 ug/ml AGEs的条件下培养48小时。使用RT-PCR和Western blot法分析m6A调控因子的表达水平。采用甲基化RNA免疫沉淀测序（methylated RNA immunoprecipitation sequencing, MeRIP-Seq）、转录组测序( transcriptome sequencing, RNA-seq）以及生物信息学技术检测并分析mRNA的表达谱和m6A修饰谱。

结果

在AGEs处理的HAECs中，METTL3、WTAP、KIAA1429、YTHDC1和YTHDF3的表达明显上调，而FTO和YTHDF1-2的表达则明显下降。有显著变化的m6A峰有1105个，其中647个上调，458个下调。基因本体（Gene Ontology, GO）分析显示，差异甲基化的mRNA主要与细胞核、核质和细胞膜有关。基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG）通路分析表明，这些 mRNA 在缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成、生物素代谢、酮体合成和降解有关的信号通路中明显富集。联合分析结果显示ASMTL, ZNF267, ETAA1, EIF3CL, ESCO2, PUS7L, C2orf74同时发生m6A修饰和表达差异。

结论

AGEs可以显著影响HAECs中m6A调控因子的表达，m6A修饰图谱发生改变，为阐明糖尿病血管病变提供了新的思路。

专家点评

武晓泓教授

浙江省人民医院

血管病变一直是糖尿病诊治和研究领域关注的重点。在今年欧洲心脏病学会年会上更新的《2023ESC糖尿病患者心血管疾病管理指南》中引入了10年心血管疾病风险评分的评估体系，强调根据患者ASCVD的风险分层有针对性地进行个体化管理。目前临床常根据BMI划分正常体重人群和超重/肥胖人群，因BMI不能完全地反映体脂的分布，故有一定的局限性。目前越来越多的研究已经发现，尽管BMI在正常的范围，但心血管危险因素已明显增加。母义明教授团队最新发表的研究发现，在BMI正常亚组中，糖尿病前期的发生率达23%，脂代谢异常的发生率达17%，颈动脉粥样斑块的人群发生率为14%，脂肪肝的发生率为13%，上述提到的异常均为心血管疾病发生的危险因素。同时，脂肪的异常堆积，尤其是在肝脏的堆积，可引起胰岛素抵抗和炎症反应，然后通过激活相关信号通路及增加细胞因子异常分泌，从而增加心血管疾病的风险。既往的研究已显示内脏型肥胖与T2DM患者的高心血管事件风险相关。但BMI在正常范围内的内脏型肥胖是否比超重或肥胖者有更高的ASCVD风险尚不清楚。因此，我们联合浙江省内11家医疗中心，以内脏脂肪面积来判断内脏型肥胖，发现T2DM合并正常体重内脏型肥胖的患者10年ASCVD风险高于T2DM合并超重或肥胖患者，无论是否伴有内脏型肥胖。提示这一人群应该纳入ASCVD的一级预防体系中，以降低心脑血管病变的风险。在发病机制方面，AGEs诱导的血管ECs损伤是糖尿病血管病变的始动因素。我们发现，AGEs可以通过抑制LKB1/AMPK通路诱导HAECs发生铁死亡，GLP-1及其小分子片段可以减轻AGEs诱导的HAECs铁死亡。并且，AGEs可以显著影响HAECs中m6A调控因子的表达，m6A修饰图谱发生改变。这些研究进展将为糖尿病血管病变的防治提供新的思路和干预靶点。

专家简介

武晓泓 教授

主任医师、教授、博士生导师

浙江省人民医院内分泌科主任

浙江省糖尿病防治中心副主任

浙江省万人计划科技创新领军人才、卫生创新人才

国家癌症中心国家肿瘤质控中心甲状腺癌质控专家委员会委员

中华医学会肿瘤学分会甲状腺肿瘤专业委员会委员

中华医学会糖尿病学分会胰岛素抵抗学组委员

中华医学会内分泌学分会基层内分泌代谢病学组委员

中国临床肿瘤学会甲状腺癌专家委员会副主任委员

浙江省预防医学会糖尿病预防与控制专业委员会主任委员

浙江省医学会内分泌学分会副主任委员

浙江省医师协会内分泌代谢科医师分会副会长

主持国家自然科学基金4项、部省级项目12项，发表论文107篇

获得省市级科研奖励5次、荣获市五一劳动奖章

参考文献：

1.Zheng J,et al.Normal-weight visceral obesity promotes a higher 10-year atherosclerotic cardiovascular disease risk in patients with type 2 diabetes .Presented at ESAD 2023,OP#190.

2.Hu K,et al.The mechanism of ferroptosis induced by advanced glycation end products in human aortic endothelial cells and the intervention of GLP-1 .Presented at ESAD 2023,SO#945.

3.Tang L,et al.Epitranscriptomic analysis of m6A RNA methylation in AGEs treated human artery endothelial cells (HAECs) .Presented at ESAD 2023,SO#938.

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